乐伐替尼(lenvatinib)、仑伐替尼对细胞的增加处置主要调节结合功能-

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为了模拟乐伐替尼的耐受药物,我们将8505C细胞系在含有25个hw-乐伐替尼的培养基中培养72天。对耐8505C乐伐替尼(8505CRes)细胞株的形态学分析显

  乐伐替尼(lenvatinib)耐受药物细胞系的建立

乐伐替尼(lenvatinib)、仑伐替尼对细胞的增加处置主要调节结合功能-
  为了模拟乐伐替尼(lenvatinib)的耐受药物,我们将8505C细胞系在含有25个hw-乐伐替尼(lenvatinib)的培养基中培养72天。对耐8505C乐伐替尼(lenvatinib)(8505CRes)细胞株的形态学分析显示,其表型从上皮细胞转换为间质细胞。更重要的是,在医治结束时,我们检查细胞的凋亡诱导。同剂量的乐伐替尼(lenvatinib)对8505CRes细胞的诱导凋亡率较亲本8505C细胞更低。我们进一步利用RT-PCR对亲本和抗性细胞系中不同标记的mRNA表达进行了表征。与亲本细胞系相比,耐受药物细胞中促生存标志物mcll-1、Bcl-2表达明显上升,促凋亡标志物Bax表达减少。此外,我们还观察到PI3K、AKT和mTOR的表达增强伴随着下游分子的激活,如RhoGTPaseeffectorp21activatedkinases(PAKs),特殊是PAK1和PAK4。有趣的是,核出口蛋白XPO1,也被称为染色体区域维持1(CRM1),被发现如今乐伐替尼(lenvatinib)抗性细胞中被激活。

  耐乐伐替尼(lenvatinib)细胞EMT和Stemness标记的分子分析

  鉴于上皮-间充质转化是干细胞样细胞的固有特性,我们接下来评估间充质耐受药物细胞中EMT和干细胞标记物的表达。耐受药物细胞中间充质标记蜗牛(p<0.05)和波形蛋白(Vimentin)的RNA水平显著上升(p<0.01)。在耐受药物细胞中,经典干细胞标志物ALDH(p<0.01)和Nanog(ns)的RNA水平也被观察到上升。然而,当检查这些间充质和stemness标记的蛋白表达时,与亲本8505C细胞相比,只有Nanog的表达显著上升(延长3.5倍)。Vimentin的表达略有延长,而Snail和ALDH2在亲本细胞系中的表达则低于亲本细胞系。由于上述标记物的RNA和蛋白表达分析结果并不完全一致,因此不能确定耐受药物细胞中EMT和stemness的出现。

  亲本和抗性细胞对的转录组分析

  我们通过RNA-seq分析来评估亲本8505C和耐受药物细胞的转录变化。分子功能的基因注释分析显示,乐伐替尼(lenvatinib)(仑伐替尼)对细胞的增加处置主要调节结合功能,包括蛋白、DNA、核苷酸、ATP等结合和催化活性。同样,生物过程的基因注释分析表明,乐伐替尼(lenvatinib)医治主要影响代谢过程和生物调控。此外,pathway的基因注释分析显示,共155条通路被调节,包括那些与血管生成、凋亡、细胞周期和炎症相关的通路。此外,符合形态变化,几个EMT标记,如Snail1Snail2和ZEB1发现上调8505cRes细胞(表1)。同时,从表1能够指出,几个致癌基因如CEACAM和NUPR1上调8505cRes甲状腺癌细胞,表明细胞抵抗乐伐替尼(lenvatinib)医治。

  靶向抑制XPO1或PAK4联合乐伐替尼(lenvatinib)可协同抑制甲状腺癌细胞生长

  接下来,我们研究了靶向核出口蛋白XPO1和RhoGTPase效应子PAK4单独或联合乐伐替尼(lenvatinib)对间变性甲状腺癌细胞的影响。XPO1抑制剂KPT-330和KPT-8602以及PAK4-NAMPT双抑制剂KPT-9274能够浓度依赖性地抑制8505C细胞的增殖。这些化合物的IC50s在低纳摩尔范围内(从23.52nM到112.1nM)。此外,我们通过PAK1抑制剂IPA-3处置8505C细胞,评估了对间变性甲状腺癌细胞抑制PAK1的效果。有趣的是,在测试浓度下,PAK1抑制没有表现出任何细胞生长抑制。

  接下来,我们评估了这些抑制剂与乐伐替尼(lenvatinib)仑伐替尼联合医治对8505C细胞增殖的影响。联合处置可协同抑制8505C细胞增殖。等波图分析进一步显示,KPT-330+乐伐替尼(lenvatinib)在所有被测剂量组合中的联合指标值均小于1(CI<1),表明协同效应。此外,KPT-8602+乐伐替尼(lenvatinib)和KPT-9274+乐伐替尼(lenvatinib)除了一个剂量组合外,在所有剂量组合中也观察到协同作用(CI<1)。这些结果表明,靶向抑制RhoGTPaseeffector或核出口蛋白可使甲状腺癌细胞对乐伐替尼(lenvatinib)医治敏感。此外,当PAK1抑制剂IPA-3联合乐伐替尼(lenvatinib)对8505C细胞生长的影响进行评估时,未观察到协同抑制。由于IPA-3选择性地抑制PAK1,而不会引发起II组PAKs(包括PAK4)的抑制,这些结果表明,虽然靶向间变性甲状腺癌细胞中的PAK4是一个可行的选择,但靶向PAK1则不是。

  XPO1或PAK4抑制可使皮下移植的甲状腺癌对乐伐替尼(lenvatinib)敏感

  受协同分析结果的鼓舞,我们接下来评估了乐伐替尼(lenvatinib)(仑伐替尼)与KPT-9274或临床级KPT-330(XPOVIO片剂含有口服KPT-330作为活性成分)联合医治从8505C细胞发展的皮下移植瘤的影响。乐伐替尼(lenvatinib)口服50毫克,每日两次,每周5天,连续三周,对肿瘤生长的影响极小。但口服KPT-330,每周2次,每次10毫克/kg,连续3周,可显著抑制8505C异种移植物的生长(p<0.05)。给予KPT-9274,每日两次,每周5天,每次100毫克/kg,连续3周,肿瘤病症轻微减轻。值得注意的是,与单药医治相比,KPT-330和KPT-9274联合乐伐替尼(lenvatinib)能够更大阶段地减少肿瘤生长。在医治过程中,小鼠的体重没有明显下降。

  与单药乐伐替尼(lenvatinib)相比,KPT-330+乐伐替尼(lenvatinib)组肿瘤总重有统计学意义。此外,乐伐替尼(lenvatinib)与KPT-330或KPT-9274联用可显著减少肿瘤组织中ki67增殖标记物。我们还评估了Vimentin在医治后基因表达的变化。与单药医治相比,乐伐替尼(lenvatinib)联合KPT-330或KPT-9274对EMT标志物Vimentin的抑制作用更强。这些结果支持使用KPT-330或KPT-9274作为单一药品或联合乐伐替尼(lenvatinib)医治耐受药物的甲状腺癌。乐伐替尼(lenvatinib)怎么选购?[药道网]能够购买到吗?详情请扫码咨询:

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